Q1：如何准备透析膜管？透析膜管的准备因膜管材质和生产工艺的差别而有所不同。注意，我们不推荐煮沸处理，因其可能损坏膜管并改变膜孔径。A.           生物技术级RCCE及PVDF膜可以用DI水冲洗15-30分钟，去除防腐剂叠氮化钠。B.           Spectra/PorR7 标准级RC15-30分钟，去除叠氮化钠即可。C.           Spectra/PorR 1-6 标准级RCspectrumlabs提供Heavy Metal Cleaning Kit。 Q2：透析的原理是什么？一般需要多长时间才能完成？透析是指溶质在浓度梯度的驱使下，选择性扩散通过半透膜，从而达到大/小分子分离，膜两侧浓度平衡，即小颗粒的溶质通过膜，而大分子物质不能通过，被截留在膜另一边。如果将样品置于透析膜管内，通过置换膜管外部的透析缓冲液，可将小颗粒物质清除，从而达到纯化大分子物质的目的。一般来说，一天之内置换3-5次缓冲液，然后在室温条件下，放在搅拌台上隔夜透析，即可达到高效的透析结果。标准的透析操作一般需要16-24小时。许多因素会影响透析效率，包括：扩散系数、pH值、温度、时间、物质浓度、样品体积、透析缓冲液体积、透析缓冲液的置换次数、膜表面积、膜厚度、分子带电荷及缓冲液搅拌速率。 Q3：透析一个样品需要多少体积的透析缓冲液？缓冲液置换频率怎么安排？透析缓冲液的体积越大，小分子扩散的驱动力越大。我们一般推荐缓冲液和样品的体积比为100:1，最佳为500：1。当扩散速率降低，膜两侧溶液趋于平衡时，通过置换缓冲液，可维持小分子扩散驱动力和透析速率。我们一般推荐在12-24小时内，置换缓冲液2到3次，具体安排如下： 第一次缓冲液置换：透析开始后2-3小时第二次缓冲液置换：透析开始后4-5小时最后一次缓冲液置换：透析隔夜之前 Q4：如何选择正确的截留分子量（MWCO）？截留分子量应该竟可能的大，以使透析速率最大化。但是，为了获得最大的样品回收率，选择的截留分子量应至少为需纯化的大分子物质分子量的一半。对于需对几种分子进行分离的应用，分子之间的分子量差至少为5倍，才能完成有效的膜透析。若不能满足分子量差的要求，可能需要使用其它的分离技术，如色谱方法或切向流过滤。 Q5：哪种膜的蛋白质结合率最低？每种膜对不同的分子具有不同的亲和性。对于球状蛋白，相对的结合亲和性由低到高为CE< RC Q6：怎样为膜管选择合适大小的膜夹？标准RC(Spectra/Por 1-7)和生物技术级RC膜由柔韧的再生纤维素聚合物制造，可使用任何一种透析膜夹密封。生物技术级CE & PVDF膜由相对刚性的聚合物制造，需要使用相对温和的通用膜夹。鉴于通用膜夹对于所有类型的膜管都能起到很好的密封作用，如不确定选择哪种膜夹合适，使用通用膜夹即可。标准膜夹一般只用于标准级RC膜管。膜夹的密封宽度一般需比膜管的扁平宽度长4-10 mm50 mm。对于所有扁平宽度规格的spectrumlabs生物技术级膜管，均有相应的膜夹可供选择。 Q7：透析膜的保存时间为多长？干包装的透析膜可保存50.1% 的叠氮化钠溶液）保存期限为3年。辐照灭菌的透析膜可保存1.5年。 Q8：透析膜变干或冻存之后是否仍可使用？湿润的透析膜变干之后，孔径受到不可逆的影响，膜变得脆弱易碎，容易泄露，不推荐继续使用。透析膜冻存之后，冰晶会使膜破裂，导致泄露，此时不推荐使用该膜。 Q9：透析膜完全不含内毒素吗？spectrumlabs确认所有透析膜不含有内毒素，符合普通实验室使用规格要求。 Q10：我需要担心透析膜上的皱纹、滚痕或折线吗？只要膜是完整的，滚痕或者折线不会影响膜的扩散特性。 Q11：CERC膜更具刚性，且不透明吗？纤维素酯（CERC）聚合物形成更加柔韧的网格结构。不透明性是由网格中孔眼的大小所决定的，孔眼越大，膜越不透明。 Q12：透析膜可以化学密封或热密封吗？CE和RCPVDF透析膜可以机械密封或热密封，通常用于样品\"封装”目的。 Q13：处理相同的蛋白样品，Spectra/PorR 透析膜可重复使用吗？我们不推荐重复使用透析膜，因为特定的处理操作可能会对膜造成污染，一定的透析条件（pH值、温度、化学接触等）也会对膜的完整性造成损害，和/或导致泄漏，特别是在打开和重新夹上膜夹时。  Q14：膜孔径有多精确，什么是MWCO？透析膜微观下呈海绵状结构，因此，更适合通过评定其截留性能来间接地定义\"孔径”，亦即\"截留分子量”（Molecular Weight Cut Off，MWCO）。MWCO定义为在17个小时内，膜截留率为90%的溶质分子量。基于此定义，选择透析膜时，MWCO应小于需要截留的分子的大小。 Q15：透析膜Spectra/PorR 2和4有什么区别？Spectra/PorR  2和412-14 kD的截留分子量。Spectra/PorR 透析膜更适合温和透析，Spectra/PorR 2可提供特定的更大和更小的扁平宽度，和/或渗透性；也就是说，Spectra/PorR 2的水渗透性比Spectra/PorR 4更优越。 Q16：关于膜表面积和样品量之间的关系有没有经验法则？表面积与体积的比值取决于膜管扁平宽度。如果有两段相同长度的膜管，扁平宽度较小的膜管具有较高的比表面积，而扁平宽度较大的膜管比表面积相对较小，也就是说，前者的透析速率更快。原因是扁平宽度较小的膜管，溶质的扩散距离较短，溶质之间通过膜孔的竞争也较小。而扁平宽度大，亦即溶质到达膜表面的距离也较长，溶质之间对膜孔的竞争也较大。一般而言，比表面积越大，透析越快。 Q17：如果膜两侧的摩尔渗透压浓度相等，但浓度梯度仍然存在，物质的通过效率如何？大多数透析结束时膜两侧渗透压相同。透析过程是由膜管内外两侧的浓度梯度驱动的。如果渗透压力有很大的差别，水会通过膜以平衡膜两侧的渗透压。如果过多的水通过膜，透析膜管可能会随水运动的方向增大或缩小，在体积增加到一定程度时，有可能导致膜夹松动或膜管破裂。 Q18：进行超滤时，透析膜能承受多大的压力？透析膜设计不适合用于压力过滤。在不影响截留分子量的前提下，最大推荐压力为1.5 psi。 Q19：一般推荐使用哪种透析液（缓冲液）？生物分子必须保存在严格的pHpH范围为6-8。以下为常用的几种可以作为缓冲液的生化溶液：·                水·                PBS·                TBS·                HEPES·                氨基酸缓冲液·                 Q20：为什么使用微米vsMW）单位，怎么转换？溶解的分子大小以分子量来定义，单位为道尔顿，而颗粒和细胞大小常以直径来定义，由于分子的结构和形态不同，相同分子量的物质，分子大小和形态可能相差较大，两者之间没有精确的对应关系。出于这个原因，许多常见的生物材料都已特别定性，并将大约的尺寸标注在转换表上作为估算的参考，以用于透析、超滤和微滤应用。道尔顿与微米单位之间的转化，请参考spectrumlabs官网\"”。 Q21：对于盐浓度较高的样品，最佳的透析方法是什么？如果可能，我们推荐使用低盐浓度的缓冲液。不推荐直接使用纯DI5M NaCl的样品，可使用500 mM NaCl的缓冲液。 Q22：可以使用绳子结扎膜管，而不使用膜夹吗？我们不推荐使用绳子结扎膜管。因为绳结对膜管的损害具有很大的不确定性，并且可能不能提供有效的密封，而导致泄露。只有膜夹才能提供足够的密封性，从而保护样品。 Q23：透析膜管应该剪多长？ 对于每种膜管扁平宽度，spectrumlabs/长度比，可方便计算透析样品所需的膜管长度。如果扁平宽度为16 mm，容积/长度比为0.79 ml/cm，要容纳5 ml的样品，则需要大约6.5 cm长的膜管。但是，为保持样品漂浮，一般需要在顶部空间预留10-20%膜长（约为1 cm）。此外，也需在两端为膜夹各预留2 cm。所以总的膜管长度应至少为11.5 cm。可根据以下公式计算膜管长度：总长度=/（容积/长度）+（额外的10-20%）+4 cm